MTS 세포 증식 및 세포 독성 검사 키트

중국어 이름:MTS 세포 증식 및 세포 독성 검사 키트

제목: MTS Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit

제품 사양: 500회
상품번호: BJ-01X6321

MTS는 MTT와 같은 테트라졸 질소 파생물에 속하는 신형 메틸 화합물이다.MTS는 살아있는 세포 속 미토콘드리아 탈수소 효소에 의해 분해돼 갈색 수용성의 갑을 생성할 수 있으며, 갑의 스펙트럼 흡수를 측정해 세포의 증식을 측정할 수 있다.

세포 배양 조작 규정:
1. 배양기 및 배양냉동저장조건준비:
1) F-12K 배양기 준비;양질의 태우 혈청, 10%;이중 저항, 1%.
2) 배양조건: 기상: 공기, 95%;이산화탄소, 5%온도: 37 ℃, 배양함 습도는 70~80% 입니다.
3) 동존액: 90% 혈청, 10% DMSO, 현용 현배.
2. 세포 처리:
1) 소생세포: 세포현액 1mL가 함유된 동존관을 37℃ 의 수욕(수면은 동존관 뚜껑보다 낮아야 함)에 빠르게 넣고 흔들어 해동하며, 미리 준비한 4mL 배양기가 함유된 15ml 원심관에 옮겨 골고루 섞는다.1000RPM 조건에서 4분간 원심을 분리하고 상청액을 버리고 배지 1mL를 넣은 후 고루 분다.그리고 모든 세포현액을 배양기 5ml를 함유한 배양병에 옮겨 밤새 배양한다.다음 날 환액하고 세포밀도를 검사한다.
2) 세포 대물림: 세포 밀도가 80~90% 에 달하면 대물림 배양을 할 수 있다.

세포 배양 방법:
1. 세포 대물림: 세포 밀도가 80-90% 에 도달하면 대물림할 수 있다
① 배양상청을 버리고 PBS 또는 생리식염수로 1~2회 세척한다.
② 2ml0.25%(T25병)를 넣어 병이나 그릇 전체를 덮고 뚜껑을 닫아 배양함에 넣어 소화시킨다.
③ 1-2min 후 현미경으로 세포를 관찰하여 대부분의 세포가 수축되고 소량의 세포가 탈락하면 가볍게 불어 소화상태를 확인한 후 *배지를 첨가하여 소화를 종료한다.만약 세포가 여전히 벽에 붙어 있다면, 배양함에 다시 넣어 가볍게 불어 떨어뜨릴 수 있을 때까지 계속 소화한다;
④ 세포현액 1000RPM 정도의 조건에서 원심분리 4min, 상청 폐기;
⑤ 신선한 배양기로 다시 매달아 배양병이나 그릇에 넣고 T25배양병에 6-8ml 배양기를 넣는다.
⑥ 부유세포는 직접 원심에서 수집하여 세포침전이 중현된 후 새로운 배양병에 분배한다.
2. 세포 소생:
① 냉동보관관을 미지근한 물 37℃에서 빠르게 흔들어 녹이고, 시간은 1min 정도이며, 배지 4-5ml를 넣고 고루 섞는다.
② 1000RPM 정도의 조건에서 원심분리 4min, 청을 버리고 1-2ml의 배지를 넣고 고루 불어 세포현액을 배지병에 넣고 적당량의 배지를 보충한다.
3. 세포동존: 세포생장상태가 량호할 때 세포동존보종을 진행한다.
① 배양상청을 버리고 PBS 또는 생리식염수로 1~2회 세척하고 1mL 0.25%(T25병) 첨가
② 1-2min 후 현미경으로 세포를 관찰하여 대부분 세포가 수축되고 소량의 세포가 탈락하여 가볍게 불어 소화상태를 확인한 후 *배지를 첨가하여 소화를 종료한다.
③ 세포현액 1000RPM 정도의 조건에서 원심분리 4min, 상청을 버리고 동존액 1ml를 첨가하여 중현세포;
④ 냉동 보관관을 프로그램 냉각 박스에 넣고 -80 ℃ 냉장고에 넣고 4 시간 후 냉동 보관관을 액체 질소 탱크로 옮겨 저장한다.

TM3(쥐고환간질세포) 5×106cells/병×2

TSCCa (인설린암세포) 5 × 106cells/병 × 2

U-2 OS(인골육종세포) 5 × 106cells/병 × 2

U251 (인교종 세포) 5 × 106cells/병 × 2

U-87 MG (인간 신경교종 세포) 5 × 106cells/병 × 2

U-937(인간조직세포 림프종세포) 5×106cells/병×2

V79(햄스터 폐세포) 5×106cells/병×2

VCaP (인간 전립선 암세포) 5 × 106cells/병 × 2

Vero (아프리카 녹색 원숭이 신장 세포) 5 × 106cells/병 × 2

WI-38(인간배아폐세포) 5×106cells/병×2

WISH(인양막세포) 5 × 106cells/병 × 2

Y1 (Y-1) (생쥐 부신피질 세포) 5 × 106cells/병 × 2

YAC-1(생쥐 림프종 세포) 5 × 106cells/병 × 2

ZR-75-1 (인간 유방암 세포) 5 × 106cells/병 × 2

ZR-75-30 (인간 유방암 세포) 5 × 106cells/병 × 2

16HBE (인간 기관지 상피세포) 5 × 106cells/병 × 2

801-D (인간 거대 세포성 폐암 세포) 5 × 106cells/병 × 2

A2(인선양낭성암세포) 5×106cells/병×2

A-427(인간폐암세포) 5×106cells/병×2

A-498(인신암세포) 5×106cells/병×2

A875(인간흑색종세포) 5×106cells/병×2

폐 알파/베타 분해효소 단백질 3 항체

삼린산 아데노신 결합 박스 트랜스퍼 단백질 F 아기 3 항체

삼린산 아데노신 결합 박스 트랜스퍼 단백질 A 아기 5 항체

ADCK1 단백질 항체

아세틸기 결합 구조역 단백질 4 항체

알파/베타 분해효소 4 항체

ADCK2 단백질 항체

아세트알데히드 탈수소효소 16가족 A1 항체

접착 분자 IgG 샘플 구조 도메인 단백질 3 항체

에탄올 탈수소효소 1 항체

델타 아미노 아세틸 아세트산 탈수 효소 항체

근측삭경화증 관련 단백질 4 항체

알파2 거구단백질 항체

ACCSL 단백질 항체

메트포르민 항체

베타 아밀로이드 전구체 단백질 결합 단백질 3 항체

성형근동단백질항체

계통성 홍반 루푸스 관련 단백질 TREX1 항체

인산화 계통성 홍반 낭창 선관 단백질 TREX1 항체

인산화 계통성 홍반 루푸스 관련 단백질 TREX1 항체

MTS 세포 증식 및 세포 독성 검사 키트헤드 관련 단백질 복합체 AP-2 μ 체인 1 항체

인산화 커넥터 관련 단백질 복합체 AP-2 μ 체인 1 항체

막 접착 단백질 7 항체

작업 규정
1. 96공판에 세포 100μL/구멍을 넣는다. 보통 세포증식실험은 구멍당 100마이크로리터 2000개의 세포를 넣는다. 세포독성실험은 구멍당 100마이크로리터 5000~10000개의 세포를 넣는다. (구체적으로 구멍당 사용하는 세포의 수는 세포의 크기, 세포증식속도의 속도 등에 따라 결정해야 한다.)37 ℃ 5% CO2 세포 배양 상자를 설치하여 24시간 배양한다.
2、.적당한 농도의 0~10μL 피시화합물을 첨가한다.
3. 96공판을 37 ℃, 5% CO2 공기 및 100% 습도를 함유한 세포배양함에서 적당한 시간에 부화시킨다.
4, 5 × MTT를 희석액으로 1 × MTT 용액으로 희석한다.
5. 구멍당 50 μL 1 × MTT 용액을 첨가하여 37 ℃ 에서 4시간 동안 부화시켜 MTT를 갑으로 환원시킨다.
6, 맑은 액체를 빨아들이고, 구멍당 150 μL DMSO를 첨가하여 갑옷을 용해하고, 평판 흔들침대로 고르게 흔들어라.
7. 효소표시기는 570nm 파장에서 구멍당 광밀도를 측정한다 (예를 들어 570nm 필터가 없으면 560-600nm 필터를 사용할 수 있다).
8. 결과 분석
a、세포의 생존율: 각 테스트 구멍의 OD값을 본저 OD값(*배지에 MTT, 무세포) 또는 공백 약물 구멍 OD값(*배지에 피험약물의 희석도에 따라 MTT, 무세포)을 빼고 각 반복 구멍의 OD값은 평균 ±SD를 취한다. 세포의 생존율은 T/C%, T는 가약 세포의 OD값, C는 대조 세포의 OD값이다.세포 생존율% = (가약세포 OD/대조세포 OD) × 100
b、T/C = 50% 의 약물 농도 (IC50) 및 T/C = 10% 의 약물 농도 (IC90) 를 구합니다.