RNA 핵산 추출 및 순화 시약함 규격

특징 이점:

1.특이성: 모든 제품에 사용된 유인물은 상세한 생물정보학적 분석을 거쳐GenBank은및 자체 구축한 방대한 데이터베이스의 비교, 사용된 모든 유인물이 종속 또는 혈청형 특이의 유전자 서열 구간임을 확보하여 세균 종속 및 혈청형에 대한 특이 검사를 실현할 수 있으며, 특이성은 모두 도달한다좋아 。

2. 재현성: 이 시리즈의 모든 제품은 대량의 실험 균주의 검증을 거쳤으며, 재현성은좋아 。

3. 민감성: 이 시리즈 제품은 검측 균에 대한 높은 민감성 검측을 실현할 수 있으며, 샘플 중 세균의 농도가103cfu/ml의번거로운 증균 과정 없이 직접 검사할 수 있다.

4. 실용성: 검측 범위가 넓고 인체에 대한 위해가 비교적 심각한17호흡기 및 장내 발병균을 재배하여 임상 샘플 및 기타 환경 샘플링에 대한 신속한 검측을 실현할 수 있으며, 전체 검측 과정은3-4시간.

5. 우위1: 다양한 시퀀스 리소스, 제외GenBank은발표된 서열외에 회사는 또 대량의 균주의 서렬해독을 진행하여 리론적으로 선택한 유인물이 량호한 보수성과 특이성을 갖고있음을 보장하였다.

6. 우위2: 이 시리즈 시약함은 모두 대량의 보수성 및 특이성 실험 검증을 거쳤으며, 회사가 보유한 풍부한 균종 자원으로 각 검사 시약함은 모두 거쳤다20여종 표준 균주와 임상 균주의 보수성 검증 및40여종의 근연 표준 균주와 임상 균주의 특이성 검증은 사용 과정에서 어떠한 가짜 양성 및 가짜 음성 보고 결과도 나타나지 않도록 한다.

추출 단계:

1.마이너스 80 냉장고에서 샘플을 꺼내 얼음 위에 놓고 천천히 해동한다;(4도까지 미리 냉동 원심분리기)

2.해동 후 (빨간색), 200 μl 클로로포름 (클로로포름 부피 Trizol 부피의 1/5 첨가), 심한 진동 (유백 빨간색), 얼음 위 10 min 정적.(클로로포름은 유기용제로 유기상과 무기상을 신속하게 분리하는 데 효과적이다. 유기상에는 주로 페놀과 단백질이 결합되어 단백질과 RNA가 이탈하고 RNA가 수상으로 들어간다.）

3.예냉 원심분리기에 배치, 원심 (4도, 12000 rpm, 15 min), 원심 분리 후 눈에 띄게 3 층 (상층 무색 투명 수상은 RNA 층, 중간 매우 얇은 유백색은 DNA 층, 하층은 빨간색은 단백질 층) 으로 나뉜다.

4.조심해서 천천히 상청을 빨아들인다 약 400 μl (적게 빨아들일지언정 많이 빨아들이지 마라), 또 다른 새로운 1.5 ml RNase-free EP 튜브에 넣고 같은 부피의 이소프로필알코올을 넣고 위아래를 거꾸로 섞어 상온에 15 min 정온으로 놓는다.

5.원심 (4도, 12000 rpm, 15 min), 흰색 침전을 볼 수 있습니다 (때로는 세포가 침전을 덜 볼 수 있으며 마이너스 20 또는 마이너스 80 2 시간 동안 방치 한 다음 다음 단계를 계속할 수 있습니다.)

6.상청을 버리고 각 튜브에 950 ul 75% 에탄올을 넣고 위아래를 뒤집어 섞는다 (총으로 흔들어 섞지 않도록 주의해라. 이렇게 하면 RNA가 용해될 수 있다.)

7. 원심(4도, 12000rpm, 10min)으로 밑부분이 뚜렷하게 흰색으로 침전되어 있음을 알 수 있다.

8. 원심분리 후 상청을 버리고 원심분리기에 넣어 다시 순리하며 10μl의 이액기로 잔류액체를 씻어내고 뚜껑을 열고 말린다(약 5min).

9.각 시료는 침전 크기에 따라 적당량의 DEPC 물 (일반 20~30μl, 때로는 침전이 보이지 않으며 10μl DEPC 수용해를 첨가할 수 있음), 불어서 용해된 RNA, 11층 효소표시기 측정농도, OD값 (260/280=1.8-2.0) 표시, 마이너스 80 보존.

참고: 중성 입자 세포 추출의 경우RNA는 세포 수가 2x106/샘플보다 클 것을 권장합니다.

비고: 조작 중 마스크를 착용한다.

PCR 반응 5요소:
참가하다PCR에 반응하는 물질은 주로 다섯 가지, 즉 유인물, 효소,dNTP、템플릿 및 Mg2+
유인물:유인물은 PCR 특이성 반응의 관건이며, PCR 산물의 특이성은 유인물과 템플릿의 DNA가 상호 보완되는 정도에 달려 있다.이론적으로, 어떤 템플릿 DNA 서열이라도 알면, 그 설계에 따라 상호 보완적인 과뉴클레오티드 사슬을 유인물로 만들 수 있으며, PCR을 이용하여 템플릿 DNA를 체외에서 대량으로 증폭시킬 수 있다.
설계 유인물은 다음 지침을 따라야 합니다.
① 유인물 길이: 15-30bp, 20bp 정도로 자주 사용된다.
② 유인물의 증폭 경간: 200-500bp가 적당하며 특정한 조건에서 10kb의 부분으로 확대할 수 있다.
③ 유인물 염기: G+C 함량은 40~60% 가 적당하며, G+C는 너무 적으면 증폭 효과가 좋지 않으며, G+C는 너무 많으면 비특이 밴드가 나타나기 쉽다.ATGC는 무작위 분포가 좋아 퓨린이나 피리딘 뉴클레오티드의 직렬 배열을 5개 이상 피한다.
④ 유인물 내부에 2급 구조가 나타나지 않도록 하고 두 유인물 간의 상호보완, 특히 3'단의 상호보완을 피한다. 그렇지 않으면 유인물 이중합체가 형성되어 특이하지 않은 증폭 밴드가 생길 수 있다.
⑤ 유인물 3'단의 염기, 특히 말단 및 꼴찌의 염기는 말단 염기가 짝을 이루지 않아 PCR이 실패하지 않도록 짝을 엄격히 요구해야 한다.
⑥ 유인물에는 적합한 효소 절위점이 있거나 추가될 수 있으며, 증폭된 표적 서열에는 적합한 효소 절위점이 있어 효소 절개 분석이나 분자 복제에 좋다.
⑦ 유인물의 특이성: 유인물은 핵산 서열 데이터베이스의 다른 서열과 뚜렷한 동원성이 없어야 한다.

주의사항:

1. 시약함은 냉장환경에서 꺼내면 실온균형이 15-30분 후에야 사용할 수 있으며, 효소표시봉투가 판으로 개봉된 후 다 쓰지 않으면 판자는 밀봉봉투에 넣어 보관해야 한다.농후한 세척액은 결정이 석출될 수 있으며, 희석할 때 수욕에서 온도를 높여 용해를 도울 수 있으며, 세척할 때 결과에 영향을 주지 않는다.

2.각 단계의 샘플링은 모두 샘플링기를 사용해야 하며, 항상 그 정확성을 교정하여 시험 오차를 피해야 한다.1회 샘플링 시간은 5분 이내로 제어되며, 표본 수가 많은 경우 소총 샘플링을 사용하는 것을 추천한다.

3. 측정과 동시에 표준 곡선을 만들어 주세요，복공을 만들다.표본 중 측정 대기 물질 함량이 너무 높은 경우 (샘플OD값이 표준품 구멍 di 한 구멍의 OD값보다 크면 먼저 샘플 희석액으로 일정 배수(n배)를 희석한 후 측정하고, 계산할 때또곱하기 총 희석 배수 (×n×5).

4.봉판막은 교차오염을 피하기 위해 일회용으로만 사용할 수 있습니다.

5. 바탕은 빛을 피해 보관하세요.

6. 설명서의 조작에 따라 엄격히 진행하며, 시험결과 판정은 반드시 효소표시기의 판독수를 기준으로 한다.

7. 모든 시료, 세척액과 각종 폐기물은 전염물에 따라 처리해야 한다.

8. 본 시약은 서로 다른 로트 번호의 성분을 혼용해서는 안 된다.

9. 유통기한이 지난 제품은 사용할 수 없습니다.

10.영어 설명서와 다를 경우 영어 설명서를 기준으로 한다.

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