MTT 검사 키트

제품 매개 변수:

MTT는 살아있는 세포 미토콘드리아 내의 탈수소 효소에 의해 짙은 자색의 formazan 결정을 환원시켜 생성할 수 있고, 죽은 세포는 이 활성이 없다는 원리로 세포 성장을 검사하는 데 널리 사용된다.짙은 자색의 formazan 결정은 용해된 후 490nm 파장의 빛 흡수를 측정하여 그 농도를 측정할 수 있으며, 이를 통해 세포의 활력을 추측할 수 있으며, 세포 증식이 왕성할수록 흡광도가 높아진다.세포의 독성이 클수록 흡광도가 낮아진다.

상품설명:

실험 보고서:

1. 분리와 배양:

1. 무균 조건에서 1-3d령 SD 쥐의 심방 조직을 제거한 후 PBS로 이 조직 블록을 2회 세척한 후 마지막에 조직을 1mm3 정도 크기로 자른다;

2. 조직 블록에 4mL 효소 소화액 (0.1% 와 0.1% I형 콜라겐 효소) 을 첨가하여 10s 혼탁하여 37 ℃ 의 조건에서 10min 소화시킨 후 점적 파이프로 불어 단세포 현액을 만들어 자연적으로 침전시키고 상청을 수집하여 10% 의 FBS 배지 함유로 소화를 종료한 후 4 ℃ 에 배치한다;

3. 나머지 조직은 다시 3~4mL 효소 소화액을 첨가하여 10s를 혼현하고 37 ℃ 를 10min 소화한 후, 상술한 방법에 따라 상청을 수집하고 소화를 중지한 후 4 ℃ 를 배치하고, 이 단계를 2-3회 반복하여 조직 *이 소화될 때까지 한다;

4. 200개의 스테인리스강 체망으로 세포 소화액을 여과하고, 1200r/min 원심 10min, 상청을 버리고, 침전 세포는 10% FBS DMEM/F12 배지 혼현을 함유하고, 25cm2 배지병에 접종하고, 37 ℃, 5% CO2 배지 상자에 배치하여 배지한다;

5. 차속으로 벽에 1h를 붙인 후 배양기를 흡출하여 실험 수요에 따라 6공판 중 접종하여 계속 배양한다;

2. 면역형광감정:

1. 심방근세포가 80% 융합될 때까지 성장할 때 배양기를 버리고 온육한 PBS로 세포를 2회 10min씩 씻은 다음 4% 의 폴리포름알데히드로 실온조건에서 15min 세포를 고정한다.

2. PBS는 10min씩 세포를 2회 세척한 후 4 ℃ 조건에서 0.1% Triton X-100 투과막을 15min 사용한다.

3. PBS는 10min씩 세포를 2회 세척한 후 실온 조건에서 4% BSA로 세포를 30min 폐쇄한다;

4, 1: 100의 비율로 알파-actin 1항을 희석한 후 4 ℃ 냉장고에 넣어 세포를 부화시켜 밤을 보낸다;

5. PBS는 세포를 3회 씻어 매번 10min씩 1: 150의 비율로 알파-액틴에 대한 2항을 희석하고 37 ℃ 조건에서 1h를 배치한다.

6. PBS로 10min씩 3회 헹구고, 마지막으로 거꾸로 형광현미경 아래에서 이미지를 관찰하고 사진을 찍는다.

배양 작업 단계:

1. 덮개 핀셋으로 덮개를 에탄올 75%에서 꺼내 무균 실크 천으로 깨끗하게 닦고 거즈를 사용하지 마십시오.

2. 뚜껑 슬라이스를 6공 배양판(구멍당 1개) 또는 배양접시에 가볍게 넣는다(평평한 접시당 2~3장 가능).

3.자외선등으로부터 직사범위내 20~30센치메터 떨어진 곳에서 2~3시간 조사한다.

4. 계수된 세포부상액을 배양판에 옮겨 캡슐을 * 배양액에 담그기;

5. 배양판을 5% CO2 수욕 부화상자에서 37 ℃ 로 2-3일 부화시키고, 밀착 세포가 커버 배양판 바닥의 2/3 면적까지 성장할 때 배양판을 제거하고, 커버 핀셋으로 커버 볼륨을 가볍게 제거하며, 증류수로 헹군 후 빠른 고정 및 면역 세포 화학 검사를 진행할 수 있다.

실험 요점 및 설명:

1.이 방법은 스텐트 세포 배양에 적용되며 스텐트 세포 배양에는 적용되지 않으며, 스텐트 세포는 스텐트 방법을 사용할 수 있습니다.

2.사용된 덮개 유리는 양질의 유리여야 하며 크롬산 세액 처리를 거쳐야 한다;

3.뚜껑은 매우 얇고 깨지기 쉬우므로 뚜껑을 벗길 때 동작이 가볍다;

4.생장 상태가 일치하는 세포가 더 필요하다면 비교적 큰 배양접시를 사용할 수 있지만, 배양액의 낭비를 피하고 오염 확률을 높이기 위해 너무 커서는 안 된다;

5. 세포접벽의 성장능력이 비교적 떨어지면 덮개를 0.5% 남짓한 폴리라이신 용액에 5-10분 정도 담가 자연적으로 말린다.

운영 포인트:

1) 배양기를 37℃ 수욕솥에 예열한다.15mL 무균의 원심관을 준비하고 예열배지 8mL를 넣는다.

2) 액체 질소 탱크에서 냉동 세포를 꺼내어 37 ℃ 의 수욕솥에 빠르게 넣고 복온한다 (깨끗한 비커를 준비하여 37 ℃ 의 물을 가득 채울 수 있다. 세포 냉동 보관관을 꺼낸 후 신속하게 비커에 넣은 후 점차 수욕솥으로 옮긴다).냉동보관소를 가볍게 흔들어 세포가 1~2min 이내*해동할 수 있도록 하고, 세포가 가장 손상되기 쉬운 온도 구간(-5~0℃)을 빨리 통과할 수 있도록 한다.동존관 관구가 물에 들어가지 않으면 안 되며 BRL (대쥐 간세포) 은 오염을 일으키지 않도록 주의해야 한다.

3) 75% 알코올로 냉동보관소를 닦은 후 다시 초정대 안에 놓고 관내 세포를 준비된 원심관 안으로 옮겨 액체를 가볍게 불어 세포를 균일하게 분산시켜 DMSO 농도를 낮추고 불 때 기포가 생기지 않도록 한다.신선한 배양기로 파이프 벽을 2회 씻어 모두 원심관 안으로 옮긴다.

4) 800rpm 원심분리 5min, 상청을 버리고 신선한 배양기를 넣고 불어서 세포현액으로 만든다.

5) 세포현액을 T25 세포병에 옮겨 적당량의 배양기를 보충하고 세포병을 가볍게 흔들어 세포분포를 균일하게 하고 온상자에 넣어 배양한다.

6) 다음 날 세포의 밀착 생장 상황을 관찰하고 신선한 배양기로 바꾸어 죽은 세포를 제거한다.계속 배양하고 세포가 80~90% 까지 자라면 합류할 때 정상적으로 대물림된다.일반적으로 갓 소생한 세포는 2~3회 대물림을 거쳐 세포의 활력이 회복된 후에야 후속 실험을 진행할 수 있다.

혈관 긴장소 1 전환 효소 억제제 항체

옹항 쇠망 전사 인자 항체

알파-1 항췌장

ATP 결합 단백질 가족 6 항체

삼린산 아데노신 결합 허아 가족 G1 항체

지연소 수체 2 항체

ANGEL1 단백질 항체

ANGEL2 단백질 항체

ANKLE2 단백질 항체

고환 특이성 앵커 단백질 1 항체

앵커 단백질 반복 구조 도메인 단백질 13B 항체

앵커 단백질 반복 구조 도메인 단백질 20A1 항체

앵커 단백질 반복 구조 도메인 단백질 20A3 항체

앵커 단백질 중복 구조 도메인 단백질 22 항체

앵커 단백질 중복 구조 도메인 단백질 50 항체

BC-020 (인간 유방암 세포) 5 × 106cells/병 × 2

BC-021(인간유방암세포) 5×106cells/병×2

BC-022(인간유방암세포) 5×106cells/병×2

BE(2)-M17(인간 신경모세포 종양세포) 5×106cells/병×2

BGC-803(인위암세포) 5×106cells/병×2

C918(인안맥락흑색종세포) 5×106cells/병×2

CAL-27(인설린암세포) 5×106cells/병×2

LS 180(인간 결장선 암세포) 5×106cells/병×2

CNE-2Z(인비인두암세포) 5×106cells/병×2

MTT 검사 키트COLO 201(인결직장선암세포) 5 × 106cells/병 × 2

CW-2(인간결장암세포) 5×106cells/병×2

CRT(인간 신경교종 세포) 5 × 106cells/병 × 2

D283 Med (인간 뇌수 모세포 종양 세포) 5 × 106cells/병 × 2

EA.hy926 (인간 배꼽 정맥 세포 융합 세포) 5 × 106cells/병 × 2

ECV-304(인간 배꼽 정맥 내피세포) 5 × 106cells/병 × 2

EJ(인방광암세포) 5×106cells/병×2

H-97(인고전이 간암세포) 5×106cells/병×2