ml105965 콜라겐 Ⅳ형 알파1(COL4α1) 인시약함

ml105965 콜라겐 Ⅳ형 알파1(COL4α1) 인시약함
소개
콜라겐 Ⅳ형 알파1(COL4A1)은 13번 염색체의 COL4A1 유전자로 인코딩된 단백질이다.그것은 IV형 콜라겐 가족에 속하며, 세 가지 구조 도메인을 포함한다: 짧은 N단 구조 도메인, 그 중심에 위치한 긴 3나선 7S 구조 도메인, 그리고 그 C단에 위치한 비콜라겐 1 (NC1) 구조 도메인.그것은 많은 조직과 세포 유형에서 보편적으로 표현된다.COL4A1은 IV형 콜라겐의 아단위로, 혈관 생성에 작용한다.이 유전자의 돌연변이는 뇌, 근육, 신장, 눈, 심혈관계 질환과 관련이 있다.이 키트인 COL4α1 면역 측정은 세포 배양상 청액, 혈청, 혈장에 있는 사람 COL4α1을 측정하는 3단계 고정협심 ELISA다.시약함에는 대장균 발현 재조합인 COL4α1과 재조합 단백질에 대한 항체가 들어 있다.천연 인간 COL4α1을 사용하여 얻은 결과는 재조합 표준품을 사용하여 얻은 표준 곡선과 평행한 선형 곡선을 보여줍니다.이 결과는 이 키트가 자연인 COL4α1의 상대 질량 값을 측정하는 데 사용될 수 있음을 보여준다.

검측 원리

시약함 은 이중 항체 협심법 을 채택한다ELISA 기술: 포획 항체 패키지를 효소 표지판에 부착하여 시료 및 표준품의 측정 대기물인 COL4α1을 포획하고, 부화 세척 후 표시된 검사 항체를 첨가하여 부화 후 세척하여'포획 항체-항원-검사 항체'면역 복합체를 형성하고, 그 후 스트렙토마이신 친화소가 우연된 매운 뿌리 과산화물 효소를 첨가하여 부화하고, 부화 후 세척하고, 이어서 TMB 시료를 첨가하면 파란색 반응을 측정한다.검사 과정에서 유리된 성분은 모두 씻어내고 효소표시기로 450nm에서 OD값을 측정해 색깔의 깊이와 옅음은 샘플에 있는 측정 대기물의 함량과 정비례해 표준 곡선을 그려 샘플에 있는 COL4α1의 농도를 계산했다.

운영 요점

1. 단백질 용액을 혼합할 때는 거품이 생기는 것을 항상 피해야 한다.교차 오염을 피하기 위해서는 각 표준품, 샘플, 시약을 첨가할 때 이액기 총머리를 교체해야 한다.또한 각 시약은 용기를 별도로 사용해야 합니다.

2. 시약이 판공에 끊임없이 첨가되도록 한다.정확한 결과를 확보하기 위해서는 부화 단계에서 봉판막을 잘 접착해야 한다.

3. 자동세판기를 사용할 때 세척완충액을 넣은 후 30초의 침수기를 넣거나 세척단계 사이에 판을 180도 회전시켜 측정정밀도를 높일 수 있다.

4. 발색제는 보드에 추가될 때까지 무색을 유지해야 한다.발색제가 빛에 노출되지 않도록 하십시오.발색제는 무색에서 파란색으로 변해야 한다.

5. 발색제와 같은 순서로 종료액을 보드에 첨가해야 한다.종료액을 넣으면 구멍에 형성된 색상이 파란색에서 노란색으로 바뀝니다.녹색 구멍은 종지액이 기질 용액과 충분히 혼합되지 않았음을 나타낸다.

필요한 기타 재료

1.효소 측정기, 450nm 측정 파장을 포함하고 동시에 600-680nm 교정 파장을 포함하는 것이 더 좋다;

2. 이액기 및 총머리;

3. 증류수 또는 이온제거수;

4.100-1000mL 눈금 측정기;

5.병 세척, 총기 배출 또는 자동 마이크로 보드 세척기;

6.수평 궤도 마이크로 공판 발진기, 500 ± 50 rpm의 속도를 유지할 수 있다;

7. 표준품과 시료를 희석하는 데 사용되는 시험관.

ml105965 콜라겐 Ⅳ형 알파1(COL4α1) 인시약함
주의사항

1.본 시약함에서 제공하는 종료액은 희황산 용액으로 일정한 부식성을 가지고 있으므로 신중하게 조작하여야 합니다.

2.본 시약함의 일부 성분은 방부제가 함유되어 있어 피부 알레르기 반응을 일으킬 수 있으므로 마스크를 착용하여 옅은 안개를 흡입하지 않도록 해야 한다.

3.발색제 B는 피부, 눈, 호흡기 자극을 일으킬 수 있으므로 마스크를 착용하고 옅은 안개를 흡입하지 않도록 해야 한다.

4.보호 장갑, 눈 및 얼굴 보호 용품을 착용하고 처리 후 손을 씻습니다.

시약 준비

1. 사용 전 모든 시약을 실온 균형에 30분 정도 둔다.

2. 세척액/희석액 구성: 세척액/희석액(20×)에 결정체가 석출되면 37℃에서 결정체를 가열하여 전부 용해해야 한다.증류수 1:20으로 희석 (예: 1mL 농축 세척액에 19mL의 증류수를 첨가)

표준품 배치

시약함에서 표준품을 꺼내 준비시험관 7개1μg/mL표준품 (200μL) 필요에 따라 일정량을 1×희석액으로 50ng/mL(예: 50μL의 표준품 모액 + 950μL의 1×희석액을 흡수하여 1000μL의 50ng/mL 농도 표준품을 제조함)로 희석한 후 6개의 시험관에 각각 500μL의 1×희석액을 첨가하여 이 6개의 단독시험관 표준에 50ng/mL 농도를 2배로 희석하여 총 6개의 표준품 배합한다.50% /ml, 25% /ml, 12.5% /ml, 6.25 ng/ml, 3.125 ng/ml, 1.563 ng/ml,농도 표준품 용액에서 흡수하다500 μL 표준품은 다음 시험관에 가볍게 불어 섞고, 이런 유추로 표준품의 배율 희석 (그림 참조), 1 × 희석액은 0 농도 표준품 (0ng/mL) 으로 사용한다

결과 계산

표준품과 견본 복공의 평균을 계산하다OD값 및 빈 구멍의 OD값을 빼서 보정 값으로 사용합니다.농도는 가로 좌표, OD값은 세로 좌표로, 좌표 용지에 쿼드 매개변수 논리 함수의 표준 곡선을 그리거나 (그림을 그릴 때 빈 그룹의 값을 제거) 쿼드 매개변수 논리 (4-P) 곡선 맞춤을 생성할 수 있는 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 표준 곡선을 생성합니다.샘플 OD값이 표준 곡선 상한선보다 높으면 적당히 희석한 후 재측정하여 샘플 농도를 계산할 때 상응하는 희석 배수를 곱해야 한다。

샘플 데이터

다음 데이터와 곡선은 참고용으로만 제공되며 실험자는 자신의 실험 데이터에 따라 표준 곡선을 만들어야 한다.

이 그림에 표시된 표준 커브는 예제로만 제공되며 결과 계산은 동일한 시험 표준품에 그려진 표준 커브를 기준으로 샘플 결과를 계산해야 합니다.
감도

샘플 테스트를 통해 본 시약함의 검측 민감도는0.39ng/mL.

특이성

이 시약함 측정은 천연과 재조합자를 식별할 수 있다COL4α1은。

기타 관련 단백질은 희석 완충액에서50ng/mL，교차반응성을 측정한다.뚜렷한 교차 반응은 관찰되지 않았다.

실험 단계 요약
1.표준품 및 샘플 추가, 37 ℃ 피광반응 1.5h, 3회 세탁.

2. 항체 검사를 추가하여,37℃ 피광반응 1h, 4회 세탁.

3. 효소 결합물을 첨가하여,37℃ 피광반응 30분, 4회 세탁.

4. 발색액을 넣고 37℃에서 15분간 빛을 피한다.

5. 종료액을 넣고 5분 안에 숫자를 읽는다

사람콜라겐Ⅳ형 α1(COL4α1)시약함은 세포 배양 상청, 혈청, 혈장 속의 사람을 정량적으로 검사하는 데 쓰인다COL4α1은, 이 제품을 사용하기 전에 이 설명서를 완전히 읽어야 합니다.사람ELISA 키트는 과학 연구에서만 사용할 수 있으며 다른 진단에서는 사용할 수 없습니다.。